液氮罐中的菌種(Bacterial species)活化是怎么回事？
菌（fungus)種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)是為了 得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。液氮罐一般可分為液氮貯存罐、液氮運(yùn)輸罐兩種。 貯存罐主要用于室內(nèi)液氮的靜置貯存，不宜在工作狀態(tài)下作遠(yuǎn)距離運(yùn)輸使用； 液氮運(yùn)輸罐為了滿足運(yùn)輸?shù)臈l件，作了專(zhuān)門(mén)的防震設(shè)計(jì)。其除可靜置貯存外，還可在充裝液氮狀態(tài)下，作運(yùn)輸使用，但也應(yīng)避免劇烈的碰撞和震動(dòng)。液氮罐使用過(guò)程中要經(jīng)常檢查?？梢杂醚塾^測(cè)也可以用手觸摸外殼，若發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)停止使用；特別是頸管內(nèi)壁附霜結(jié)冰時(shí)不宜用小刀去刮，以防頸管內(nèi)壁受到破壞，造成真空不良，而是應(yīng)將液氮取出，讓其自然融化。菌種發(fā)酵又稱(chēng)酦酵有一般需要 2-3 代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所 以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境(environment) 要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。自增壓液氮罐
目前(International)國(guó)內(nèi)常用的 菌種保存方法包括(bāo kuò)： 定期移植法、 液體石蠟法、 沙土管法、 真空冷凍干燥法、 80℃ 冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。
對(duì)于不同的保存方式活化的方式也不同：
1 定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡(jiǎn)單，直接轉(zhuǎn)接即可;
2 液體石蠟法保存的菌種在復(fù)蘇時(shí)，挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上， 生長(zhǎng)繁殖（fán zhí）后，再重新轉(zhuǎn)接一次;
3 沙土管法保存菌種(Bacterial species)在復(fù)蘇時(shí)，在無(wú)菌(意思：沒(méi)有活菌)條件下打開(kāi)沙土管，取部分沙土粒于適 宜的斜面培養(yǎng)(to c*te)基上， 長(zhǎng)出菌落后再轉(zhuǎn)接一次。 或取沙土粒于適宜的液體(liquid)培養(yǎng)基中， 增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面;
4 真空冷凍(freezing)干燥法保存菌種在復(fù)蘇時(shí)先用 70%酒精棉花擦拭安瓿上部，將安瓿 管頂部燒熱， 用無(wú)菌(意思：沒(méi)有活菌)棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷 子頸部輕叩一下，敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端，用無(wú)菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用(use)無(wú)菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上，進(jìn)行適溫培養(yǎng);
5 -80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種(Bacterial species)復(fù)蘇時(shí)，從冰箱中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng) 立即放置 38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并適當(dāng)快速搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為 止，約需 50 秒-100 秒。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管，將網(wǎng)站內(nèi)容物移**適宜的培養(yǎng)基 上進(jìn)行培養(yǎng) 6 液氮超低溫凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇與-80℃ 冰箱凍結(jié)法保存菌種復(fù)蘇相似，從液氮罐(Liquid)中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置在 38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并 適當(dāng)搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，一般約需 50 秒-100 秒。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移**適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
總結(jié)一下菌種活化需要以下幾個(gè)步驟（procedure)：
**配置菌（fungus)種適宜生長(zhǎng)(Grow)的培養(yǎng)基
第二將菌（fungus)種從保藏狀態(tài)恢復(fù)到室溫狀態(tài)，比如將冷凍(freezing)的菌種解凍第三將通過(guò)操作將保藏的菌種接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此步驟稱(chēng)為菌種復(fù)壯
第四步挑選培養(yǎng)基茁壯的菌落，挑選其中部分菌落接種到新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，重復(fù)此步驟（procedure) 2-3 次，從而得到生長(zhǎng)(Grow)良好的菌落
經(jīng)過(guò)這四個(gè)步驟就到達(dá)將菌種從保藏狀態(tài)活化的目的
有同學(xué)已經(jīng)說(shuō)的很專(zhuān)業(yè)(zhuān yè)了，我就給你說(shuō)些簡(jiǎn)單實(shí)用的。不知道你出于何種目的要進(jìn)行活化。 如果你是用凍存管保存的菌株進(jìn)行活化， 取出 2 顆小珠放在適宜的固 體培養(yǎng)(to c*te)基上，合上蓋讓小珠在平皿上滾動(dòng)，適宜條件培養(yǎng)就可以了。長(zhǎng)出一個(gè)菌 落，你再繁殖就可以了。如果你是凍干粉的菌種(Bacterial species)，準(zhǔn)備適宜的液體培養(yǎng)基，少少一點(diǎn)點(diǎn)粉末接種就可以了，根據(jù)此菌種一般液體培養(yǎng)所需時(shí)間，大概在 36-48h， 你還可以在觀察(Observed)到液體渾濁、試管底部有沉淀（precipitation）時(shí)(沉淀者也可能為原本死亡的細(xì) 菌)，取 100 微升液體涂抹(smear)在固體培養(yǎng)基上。 一般的話，復(fù)蘇的菌種需要重復(fù)幾次復(fù)壯。自增壓液氮罐